. 大腸桿菌&總大腸菌群現場檢測套件|雙通道螢光儀- 高識能股份有限公司 High View Innovation

大腸桿菌&總大腸菌群現場檢測套件-雙/單通道螢光儀

 

大腸桿菌(E. coli)是常見存在溫血生物大腸中的細菌。大多大腸桿菌菌株是無害的,但某些會對人類造成嚴重的食物中毒。總大腸菌群(Total Coliform)是定義為棒狀的格蘭氏陰非孢子形成的細菌,可以在35-37℃培養之下,與酸和氣體產生發酵乳醣(大腸桿菌屬於總大腸菌群的一種類型)。這兩種細菌常常用於食品和水的衛生質量指標。高識能提供的便攜式現場檢測試劑盒,是利用螢光基底在對一種細菌特定酶水解時產生螢光,使用手持式螢光分析儀即可測量這些細菌的存在。

 

檢測性能:
● 快速(30分鐘測試加培養時間),方便,高靈敏度。(如果先行校準可半定量測量。)
● 高度便攜式現場測試套件,使用便攜式螢光分析儀。
● 靈敏度:100 CFU/樣品,8小時培養時間。1 CFU/樣品,10小時培養時間。
● 可應用於1 ml水樣品,食品表面,食品加工設備的表面,人類或動物表面。

 

需要套件:
● 便攜雙通道螢光分析儀
● 大腸桿菌便攜單通道螢光分析儀
● 總大腸菌群便攜單通道螢光分析儀
● 大腸桿菌檢測試劑盒,50次測試
● 總大腸桿菌檢測試劑盒,50次測試

 

檢測試劑盒內容(大腸桿菌或總大腸菌群):
● 試劑A (基底): 3.5毫升
● 試劑B (酶誘導劑): 2毫升
● 試劑C (溶解劑): 6毫升
● 培養介質粉:0.8克
● 大塑料瓶(樣本):50個
● 小塑料瓶(混合):50個
● 人造絲棉籤:50個

 

可額外購買的材料/工具:
套件手提箱、5位設定移液器、一次性移液頭

 

檢測步驟:
檢測須知: 靶生物在某些環境壓力下,可能無法產生可檢測的酶。因此,培養的階段可能是必要的。如一項測試沒有經過培養階段而得到陰性的結果,而測試人員對此結果有所懷疑,那麼就需進行3-10小時的培養階段,使微生物生出可檢測的酶。更重要的是,如果你需要檢測低數量的有機體(每一採樣低於25萬CFU),一定要經過3-10小時培養階段。

Ⅰ、準備表面樣品:
1、如果需要培養,在無菌容器中將130mg培養介質粉溶解到每10mL的蒸餾水中製備培養基液。培養基液可以在4℃下儲存長達1週。
2、移取1 mL培養基液(如果培養)或蒸餾水(如果沒有培養)到一個大塑料瓶(樣品)瓶中。
3、加入1滴試劑B (酶誘導劑) 到(樣品)瓶中。
4、滴2滴大塑料瓶中的溶液在人造絲棉籤中,擦拭測試區域收集細菌樣品。(注意:按照正確的擦拭技術以獲得最佳細菌樣品。)
5、將人造絲棉籤尖端放入(樣品)瓶中。攪拌以將棉籤上細菌溶液與溶液混合,然後剪斷棉籤柄,將棉籤尖端留在(樣品)瓶,以將細菌可以留在瓶中。關緊瓶蓋。跳到步驟6。

  1. Ⅱ、準備水樣品:
    1、如果需要培養,在無菌容器中將150mg培養介質粉溶解到每1mL的蒸餾水中製備濃縮培養基液。濃縮培養基液可以儲存在4℃長達1週。
    2、吸取1 mL水樣於一個大塑料瓶(樣品)瓶。如需培養,吸取0.1 mL濃縮培養基液加到(樣品)瓶。
    3、添加1滴試劑B (酶誘導劑) 到(樣品)瓶。將瓶蓋關緊混合調勻。跳到步驟6。

    Ⅲ、測試程序:
    6、如果需要培養,把(樣本)瓶置於38.5o C下至少3-10小時。如果是培養過夜,培養時間最多16小時,且最好不超過16個小時以減少假陽性的可能性。(半定量測量過程需要固定培養10小時。)
    7、取出一個小塑料瓶(混合),加入3滴試劑C(溶解劑)於此瓶中。
    8、用一次性吸管或移液器吸頭,吸200μL的樣品到(混合)瓶。用吸管吸取輕輕地混合5-10次。
    9、等待5-6分鐘。同時打開螢光分析儀預熱儀器。
    10、加入2滴試劑A(基底)到(混合)瓶。蓋上瓶蓋,輕輕倒立搖動混合。等待1分鐘。
    11、將(混合)瓶放到螢光分析儀中並將儀表蓋關緊。(注意:用無絨布擦拭瓶外,並確保瓶內沒有氣泡。每次瓶子應保持相同的位置方向。)

  2. A、定性測量:
    10、從雙通道螢光儀的主螢幕上,按【測量】→ 如果測量大腸桿菌按【通道1】,如果測量總大腸菌群按【通道2】。(如果使用單通道螢光儀,按【化驗1】)
    11、按【測量】,寫下顯示在螢幕上的數值為P1。
    12、如果P1 > 30,000或螢幕上顯示“超限”,樣品是陽性的,即刻停止。否則,繼續下一個步驟。
    13、不要移動(混合)瓶。等待20分鐘,儀表會自動測量,寫下顯示在螢幕上的數值為P2。
    14、如果數值(P2–P1)>(7% x P1),或P2是"超限",樣品為陽性。
    15、如果數值(P2–P1)<(3% x P1),樣品為陰性。
    16、如果(P2–P1)是介於(3% x P1)與(7% x P1)之間,再等待20分鐘後按【返回】→【測量】複試,得到的結果數值為P3。如果(P3–P1)>(7% x P1)則樣品為陽性。否則,樣品為陰性。
    17、您可以記錄一個樣品P1或P2的值,然後再更改到另一個樣品,以測試多個樣品。但20分鐘後測量需要手動測量以控制準確時間。
    1. B、半定量測量(此方法只提供參考,並只適用於小的動態範圍: 2~3個數量級的CFU):
      10、此過程需要以培養介質固定培養10小時(或建構CFU表時使用的培養時間)。
      11、從雙通道螢光儀的主螢幕上,按【測量】→ 如果測量大腸桿菌按【通道1】,如果測量總大腸菌群按【通道2】。(如果使用單通道螢光儀,按【化驗1】)
      12、按【空白】,然後按【測量】。螢幕上數值應接近於零。
      13、不要移動(混合)瓶。等待20分鐘,儀表會自動測量,寫下顯示在螢幕上的數值為P。
      14、參考下面(C)已建構CFU表,使用線性或對數內插P值,計算CFU估計值。
      15、在測試過程中,保持與建構CFU表測試時相同的溫度,以得到正確的結果。

    2. C、建構CFU表:
      1、從測量程序1.開始,執行整個【半定量測量】過程。
      2、在大塑料瓶(樣本)中添加已知CFU量的細菌。建議使用幾個10倍的樣品(例如1, 10, 100, 1000 CFU)。
      3、固定培養10小時(或使用者根據建構CFU測量範圍決定),獲得相對應原始CFU值的測量數值P。這成為CFU表。
      4、對每一批新的試劑,需要執行這個建構CFU表過程。每批試劑的CFU表有效期3個月。
      5、建議:每20分鐘的培養,細菌數量將增加一倍。所以控制培養時間很重要的。